高压蒸汽灭菌，用高温加高压灭菌，不仅可杀死一般的细菌、真菌等微生物，对芽孢、孢子也有杀灭效果，是最可靠、应用最普遍的物理灭菌法。主要用于能耐高温的物品，如培养基、金属器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡胶及一些药物的灭菌。高压蒸气灭菌器的类型和样式较多，如：①下排气式压力蒸气灭菌器是普遍应用的灭菌设备，压力升至103.4kPa（1.05kg/cm2），温度达121.3°C，维持15~30分钟，可达到灭菌目的。②脉动真空压力蒸气灭菌器已成为最先进的灭菌设备。灭菌条件要求：蒸气压力205.8kPa（2.1kg/cm2），温度达132℃以上并维持10分钟，即可杀死包括具有顽强抵抗力的芽孢、孢子在内的一切微生物。

另一种是广泛使用的下排气式高压灭菌器，其下部设有排气孔，用以排出内部的冷空气。分有手提式、立式和卧式等类型。手提式是小型灭菌器，全重12kg左右。立式是老式高压锅，使用时需加水16L左右。至于卧式高压灭菌器可处理大量物品，最为常用。结构上有单扉式和双扉式两种。后者有前、后两个门，分别供放入和取出物品之用。灭菌室由两层壁组成，中有夹套，蒸汽进入灭菌室内，积聚而产生压力。蒸汽的压力增高，温度也随之增高。蒸汽压达103.95～137.29kPa(1.06～1.40kgf/cm2)时，温度上升至121～126℃，维持30分钟，能杀灭包括耐热的细菌芽胞在内的一切微生物，达到灭菌目的。

高压蒸汽灭菌器的分类，按照样式大小分为手提式高压灭菌器、立式压力蒸汽灭菌器、卧式高压蒸汽灭菌器等。

手提式高压灭菌器为18L、24L、30L。立式高压蒸汽灭菌器从30L-200L之间的都有，每个同样容积的还有分为手轮型、翻盖型、智能型，智能型又分为 标准配置、蒸汽内排、真空干燥型。还可以根据客户的要求加配打印机。还有大型卧式的高压灭菌锅。

到达灭菌所需时间后，应即熄火或关切进气阀，逐渐开放排气阀，缓缓放出蒸汽，使室内压力下降至0。灭菌物品为敷料包、器械、金属用具等，可采用快速排气法。如灭菌物品是瓶装药液，不宜减压过快，以免药液沸腾或喷出瓶外。将门打开，再等10～15分钟后取出已灭菌的物品，利用余热和蒸发作用来烤干物品包裹。

（1）热电偶测试法：

使用时将热电偶的热敏电极插入物品包内，通过电流的变化反应测出作用温度，可从温度记录仪描出的记录纸上观察整个灭菌过程中的温度曲线。新式高压蒸汽灭菌器都带有热电偶和温度记录仪的装置。

（2）留点温度计测试法：

留点温度计的最高温度指示为160℃，使用时先将其水银柱甩到50℃以下，放在灭菌物品内，灭菌完毕后方可取出观察温度计数，是其缺点。

（3）化学指示剂测试法：

将一些熔点接近于高压灭菌所需温度的化学物质晶体粉末装入小玻璃管内，在火上封闭管口，做成指示管。灭菌时将指示管放入物品内，灭菌完毕取出指示管，如其中化学物质已经熔化，说明灭菌室内的温度达到了指示管所指示的温度。常用化学物质的熔点为：安息香酸酚，110℃；安替比林，111～113℃；乙酰苯胺，113～115℃；琥珀酸酐，118～120℃；苯甲酸，121～123℃；芪（二苯乙烯），124℃；硫黄粉的熔点为121℃，但国内多数医院所用的硫黄熔点为114～116℃，最低者仅111.2℃，可见硫黄熔点法判断高压灭菌的效果是不可靠的。

1982年上海市卫生防疫站研制了一种变色管，在2%琼脂内加入1% NTC（新三氮四氯），趁热吸取1ml左右置入耐高压小玻璃管内，封口备用。使用时将其放入物品最难达到灭菌的部位。当灭菌室内压力达到6.8kg（15 lb），温度达到（120±1）℃并维持15分钟后，指示管内无色琼脂变为紫蓝色物质。若灭菌温度和时间未达到要求，则不会变色。

（4）微生物学测试法：

国际通用的热力灭菌试验代表菌株为脂肪嗜热杆菌芽胞，煮沸100℃致死时间为300分钟；高压蒸汽121℃致死时间是12分钟，132℃为2分钟；干热160℃致死时间为30分钟，180℃为5分钟。制成菌片，套入小封套，置入灭菌物品内部。灭菌完毕后，取出菌片，接种于溴甲酚紫蛋白胨液体培养管内，56℃下培养24～48小时，观察结果。培养后颜色不变，液体不混浊，说明芽胞已被杀灭，达到了灭菌要求。若变成黄色，液体混浊，说明芽胞未被杀灭，灭菌失败。

（5）纸片测试法：

现多采用AttestTM生物指示剂。高压蒸汽灭菌所用生物指示剂是以脂肪嗜热杆菌芽胞制备，干热灭菌和环氧乙烷灭菌所用生物指示剂则是以枯草杆菌黑色变种芽胞制备。